基因工程的基本内容
六. 基因操作的基本步骤
（一）取目的基因
目的基因:是人们所需要的特定基因
苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因
植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因
种子的贮藏蛋白的基因
人的胰岛素基因、干扰素基因等
主要途径：① 从供体细胞的dna中直接分离基因 ② 人工合成基因。
1. 直接分离基因:最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。
具体操作：供体细胞中的dna 切成许多片段 重组dna
受体细胞（大量复制） 基因扩增 分离含有目的基因的细胞 把带有目的基因的dna片段分离出来
优点：操作简便
缺点：
① 工作量大，具有一定的盲目性
② 真核细胞的基因含有不表达的dna片段，不能直接用于基因的扩增和表达
主要应用：如许多抗虫、抗病毒的基因都可以用上述方法获得。
2. 人工合成基因：
（1）逆转录法
以目的基因转录成的信使rna为模板，反转录成互补的单链dna，然后在酶的作用下合成双链dna，从而获得所需要的基因。
目的基因mrna 单链dna 双链dna（目的基因序列）
（2）化学合成法
根据已知的蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的信使rna序列，然后按照碱基互补配对原则，推测出它的结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，以单核苷酸为原料合成目的基因
蛋白质氨基酸序列 mrna序列 dna序列 目的基因
优点：目的性强，比较容易获得真核基因序列
缺点：操作技术性强，不容易获取，基因表达不容易控制
主要应用：如人的血红蛋白基因、胰岛素基因等就可以通过人工合成基因的方法获得。
重要发展：dna序列自动测序仪对提取出来的基因进行核苷酸序列分析，扩增dna技术（也叫pcr技术），使目的基因在短时间内成百万倍地扩增。
a. 目的基因与运载体结合
b. 将目的基因导入受体细胞
常用受体细胞：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。
主要手段：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
质粒 细菌 目的基因扩增
感受态细胞：能够接受外源dna的细胞
将细菌用氯化钙处理，以增大细菌细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒易进入受体细胞。
c. 目的基因的检测和表达
1. 转基因结果：
① 在全部受体细胞中，真正能够摄入重组dna分子的受体细胞很少
② 重组dna转移成功的受体细胞不一定能够表达
③ 必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。
2. 检测的方法
（1）抗性监测：
（2）性状检测：
受体细胞是否表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。
